ساخت اپی تلیوم شبه اندومتر بر روی ماتریکس خارج سلولی در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از سلول های بنیادی جدا شده از بافت اندومتر انسانی

چکیده هدف از این مطالعه کشت سه بعدی سلول های cd146+ اندومتر انسانی درون اسکافولد کلاژن/ماتریژل بر روی سلول های عضل? صاف میومتر به منظور ساخت اپی تلیوم شبه اندومتر بود و به همین منظور در ابتدا سلول های بنیادی اندومتر ماهیت و توانایی قابلیت تمایز آن ها مورد ارزیابی قرار گرفت. برش های بافت اندومتر انسان برای مارکر cd146، برخی مارکرهای پرتوان مانند oct4، nanog، sox2، klf4 و مارکرهای معمول سلول های بنیادی مزانشیمی مانند cd90 و cd105 مورد بررسی ایمنوهیستوشیمی قرار گرفتند. حضور این مارکرها در سلول های اندومتر کشت شده در پاساژ چهارم توسط روش های ایمنوسیتوشیمی و فلوسایتومتری هم مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس سلول های cd146+ جدا شده با macs، تعیین کاریوتایپ شدند و تمایز آن ها به رده های مختلف استئوژنیک، آدیپوژنیک، پروژنیتورهای عصبی و شبه الیگودندروسیت ها بررسی شد. علاوه بر این، ساخت اپی تلیوم شبه اندومتر توسط کشت سه بعدی سلول های cd146+ اندومتر انسانی بر روی لای? عضل? صاف میومتر با استفاده از اسکافولد کلاژن/ماتریژل به مدت ده روز انجام گرفت. در پایان طول مدت کشت، تمایز و تشکیل سلول های شبه اپی تلیومی توسط مطالعات مورفولوژیکی و فراساختاری و همچنین آنالیز بیان ژن های استئوپونتین (spp1)، ماتریکس متالوپروتئیناز دو (mmp2) زونولا آکلودنس (zo-1)، لامینین آلفا 2 (lama2) و کلاژن 4 (col4a1) با استفاده از روش rt-pcr و پروتئین cd9 با استفاده از وسترن بلات انجام شد. نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که سلول های اندومتر انسان با خاصیت بنیادی و پر توانی بیشتر در لای? قاعده ای قرار گرفته اند. سلول های اندومتر کشت شده در پاساژ چهارم مارکرهای cd90 و cd105 را بیان کردند، اما بیانی از مارکرهای هماتوپوئیتیکی، اندوتلیالی و اپی تلیالی نداشتند. 27 درصد از سلول های کشت شده مارکر cd146، مارکر شناخته شده برای سلول های بنیادی استرومای اندومتر، را بیان کردند. درصد خلوص سلول های cd146+ پس از جداسازی با macs 80 درصد بود. این سلول های جدا شده دارای کاریوتایپ طبیعی بودند (97 درصد). همچنین سلول های cd146+ توانایی تمایز به رده های آدیپوژنیک، استئوژنیک، پروژنیتورهای عصبی و شبه الیگودندروسیت ها را دارند. علاوه بر این نتایج بیانگر این بود که کشت سه بعدی سلول های cd146+ اندومتر انسانی درون اسکافولد کلاژن/ماتریژل بر روی لای? عضل? صاف میومتری قادر به ایجاد ساختارهای شبه غددی اندومتر در شرایط in vitro هستند. مشاهدات فراساختاری نشان داد که سلول های مفروش کنند? ساختارهای شبه غددی دارای قطبیت بوده و از سطح بازال روی غشای پایه و در سطوح جانبی با یکدیگر اتصالات محکم و دسموزوم داشتند و نیز در سطح فوقانی دارای زوائد و برجستگی های شبه میکروویلی بودند. همچنین این مشاهدات توسط بیان مارکرهای spp1، mmp2، zo-1، lama2 و col4a1 در سطح ژنی و cd9 در سطح پروتئینی که همگی مربوط به ویژگی های سلول های اپی تلیومی هستند هم تائید شدند. در مجموع تحقیق حاضر نشان داد که کشت سه بعدی سلول های cd146+ اندومتر انسانی درون اسکافولد کلاژن/ماتریژل بر روی سلول های عضلانی صاف میومتر توانایی ساخت اپی تلیوم شبه اندومتر را دارند. این سیستم کشت کاربردهای مهمی در سلول درمانی و مدل های لانه گزینی دارد.